La barrera sangre-testículo (BST) se forma a partir de uniones estrechas (UE) entre las células de Sertoli. Esta estructura dinámica, que establece un entorno privilegiado inmunológicamente que protege a las células germinales haploides formadas en la pubertad de las células del sistema inmunológico innato, protege la fertilidad masculina. La testosterona producida en las células de Leydig es uno de los principales reguladores de la expresión de proteínas de UE y de la dinámica de la BST. Sin embargo, aunque se ha asumido que los efectos de la testosterona sobre las UE y la BST son mediadas a través del receptor androgénico clásico (AR), resultados más recientes ponen en duda la importancia de este receptor. ZIP9, un receptor androgénico recientemente identificado en las membranas plasmáticas, media los efectos de la testosterona que promueven la expresión de proteínas de UE y la formación de UE en una línea celular de Sertoli de rata que carece del AR clásico. Aunque estos hallazgos sugieren que ZIP9 media estos efectos de la testosterona, no se puede excluir la participación del AR clásico en estos eventos. Aquí utilizamos células de Sertoli de rata adulta inmortalizadas que expresan tanto ZIP9 como AR y abordamos la implicación de estos receptores en la estimulación de la expresión de proteínas de UE y la formación de UE en respuesta a la testosterona y al péptido androgénico IAPG que actúa a través de ZIP9. Encontramos que tanto la testosterona como el IAPG desencadenan la llamada vía de señalización no clásica de la testosterona y estimulan la expresión de proteínas asociadas a UE y la formación de UE. El silenciamiento de la expresión del AR clásico no tuvo efecto en las respuestas, mientras que el silenciamiento de la expresión de ZIP9 las bloqueó completamente. Nuestros resultados demuestran que ZIP9 es el único receptor androgénico involucrado en la regulación de la expresión de proteínas de UE y la formación de UE en la BST.