El estado primordial pluripotente humano se mantiene mediante un equilibrio complejo de varias vías de señalización que rigen el mantenimiento y compromiso de la pluripotencia. Aquí, exploramos un enfoque multiparamétrico utilizando un diseño factorial completo y un sistema de cultivo simple y bien definido para evaluar las contribuciones individuales y sinérgicas de las señalizaciones de Wnt, FGF y TGFbeta a la pluripotencia y especificación de linajes de células madre pluripotentes inducidas humanas (hiPSC). El agrupamiento jerárquico y los modelos cuadráticos resaltaron un efecto dominante de la señalización de Wnt sobre la señalización de FGF y TGFbeta, atrayendo a las hiPSC hacia linajes mesendodérmicos. Además, se observó un efecto sinérgico entre la señalización de Wnt y FGF que tuvo una contribución negativa al mantenimiento de la pluripotencia y una contribución positiva al compromiso con ectodermo y mesodermo. Además, la señalización de FGF y TGFbeta solo contribuyó significativamente a puntuaciones negativas de ectodermo, lo que sugiere que el efecto de ambos factores en el mantenimiento de la pluripotencia reside en un equilibrio de señales inhibitorias en lugar de una estimulación proactiva de la pluripotencia de las hiPSC. En general, nuestro enfoque de modelado multiparamétrico de señalización en seco puede contribuir a dilucidar las contribuciones individuales y sinérgicas, proporcionando un grado adicional de comprensión de los complejos mecanismos regulatorios de la pluripotencia y compromiso humano.