La influenza equina (IE) es una enfermedad viral altamente contagiosa de los équidos caracterizada por fiebre y signos respiratorios. Al igual que otros virus de la influenza A, la deriva o el cambio antigénico podrían llevar a una ruptura de la inmunidad inducida por la vacuna si las cepas de la vacuna no se actualizan. El objetivo de este estudio fue caracterizar genéticamente las cepas de IE que circulan en Italia, detectadas en muestras positivas por PCR recolectadas de casos sospechosos, especialmente en ausencia de vigilancia activa formal. Métodos: Entre febrero y abril de 2019, se enviaron muestras de sangre y hisopos nasales recolectados de cada uno de los 20 caballos sintomáticos del norte y centro de Italia al Centro Nacional de Referencia para Enfermedades Equinas en Italia para confirmar el análisis preliminar realizado por otros laboratorios. Resultados: Ninguno de los sueros analizados mediante inhibición de hemaglutinación y hemólisis radial simple presentó un patrón de reactividad serológica predominante para ningún antígeno empleado. Todos los hisopos nasales fueron positivos con IAV RRT-PCR. Solo se identificó una cepa, aislada en un huevo de gallina embrionado de una muestra recolectada de un caballo de un establo ubicado en Brescia, Lombardía, como H3N8 linaje de Florida clado 1 (FC1). En los árboles filogenéticos construidos, esta cepa se encuentra dentro del FC1, junto con el virus aislado en Francia en 2018 (MK501761). Conclusiones: Este estudio informa sobre la primera detección de H3N8 FC1 en Italia, destacando la importancia de monitorear las cepas de IE circulantes para verificar la adecuación de la composición de la vacuna para una máxima eficacia.