La criopreservación, que consiste en almacenar material biológico en nitrógeno líquido (LN, -196 grados C), ofrece una opción valiosa para la conservación a largo plazo de semillas no ortodoxas y especies propagadas vegetativamente en el sector de la agrobiodiversidad y la flora silvestre. Aunque la criobanca a gran escala de colecciones de germoplasma ha ido en aumento en todo el mundo, la amplia aplicación de protocolos de criopreservación en flora silvestre se ve obstaculizada por las dificultades en la propagación in vitro y la falta de protocolos de criopreservación universales, entre otros. Este estudio estableció un enfoque sistemático para desarrollar un procedimiento de cultivo in vitro y criopreservación por vitrificación en gotas para los brotes. El procedimiento estándar incluye una precultura de dos pasos con 10% de sacarosa durante 31 horas y con 17.5% de sacarosa durante 16 horas, osmoprotección con solución de carga C4-35% (17.5% de glicerol + 17.5% de sacarosa) durante 30 minutos, crioprotección con A3-80% (33.3% de glicerol + 13.3% de dimetilsulfóxido + 13.3% de etilenglicol + 20.1% de sacarosa) a 0 grados C durante 60 minutos, y enfriamiento y recalentamiento utilizando tiras de papel de aluminio. Después de la descarga, un procedimiento de regeneración en tres pasos que comienza con un medio sin amonio con reguladores de crecimiento fue esencial para desarrollar plántulas normales a partir de brotes criopreservados. La superposición líquida sobre el medio gelificado dos semanas después de la inoculación resultó en un crecimiento vigoroso durante los subcultivos. Además, la superposición líquida aumentó la regeneración de LN en hasta un 80%, es decir, un 23% más que sin superposición líquida.