Los probióticos enfrentan condiciones adversas durante su tránsito a través del tracto gastrointestinal (TGI) de los peces debido a los ambientes de bajo pH y los fluidos intestinales. Por lo tanto, la evaluación de la viabilidad de los probióticos bajo condiciones gastrointestinales simuladas es un paso importante a considerar para la suplementación de probióticos en la alimentación de peces antes de los ensayos in vivo. Por lo tanto, este estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto de las condiciones simuladas del estómago e intestino sobre la viabilidad de A12 encapsulado utilizando un modelo de digestión in vitro para tilapia. Se utilizó un diseño de Box Behnken para evaluar el efecto potencial de tres factores, a saber, el pH del estómago, el tiempo de residencia en el estómago y la cantidad de enzimas, sobre la viabilidad de A12 encapsulado. Como resultados principales, un pH bajo (4.00), un largo tiempo de residencia (4 h) y una cantidad de enzimas (2.68 U de actividad proteasa total) llevaron a recuentos celulares finales más bajos después de las fases del estómago y el intestino. Las bacterias probióticas encapsuladas mostraron una mayor viabilidad (< 0.05) y actividad antibacteriana (< 0.05) contra el patógeno que las bacterias no encapsuladas. Los resultados sugieren que A12 sobrevive en condiciones del TGI y que el modelo in vitro propuesto podría utilizarse para explorar la viabilidad de las bacterias probióticas destinadas a la suplementación en la alimentación de peces.