La quimioterapia se usa frecuentemente para tratar el retinoblastoma; sin embargo, este método de tratamiento tiene efectos adversos sistémicos severos e una efectividad terapéutica inadecuada. Los vesículas extracelulares (EVs) son importantes portadores de información biológica que median la comunicación local y sistémica entre células en entornos sanos y patológicos. Estas vesículas endógenas se han identificado como importantes vehículos de entrega de fármacos para una variedad de cargas terapéuticas, incluido el doxorrubicina (Dox), con beneficios significativos sobre las técnicas tradicionales. En este trabajo, se emplearon EVs como nanopartículas naturales de entrega de fármacos para cargar Dox para una entrega dirigida a líneas celulares humanas de retinoblastoma (Y-79). Se produjeron dos subtipos de EVs a partir de distintas líneas celulares de cáncer de mama (4T1 y SKBR3) que expresan un marcador que interactúa selectivamente con las células de retinoblastoma y se cargaron con Dox, utilizando el mecanismo de carga endógeno de las células. In vitro, observamos que la entrega de Dox con ambos EVs aumentó la citotoxicidad al tiempo que reducía drásticamente la dosis del fármaco. Los EVs cargados con Dox, por otro lado, inhibieron el crecimiento de las células cancerosas activando la caspasa-3/7. La interacción directa de los componentes de la membrana de los EVs con los receptores de la superficie celular de retinoblastoma resultó en una entrega eficaz de fármacos a las células cancerosas. Nuestros hallazgos enfatizan el potencial intrigante de los EVs como métodos óptimos para entregar Dox al retinoblastoma.