Las metástasis esqueléticas son la forma más común de tumor secundario asociado con el cáncer de próstata (CaP). La función aberrante de las células óseas vecinas a estos tumores conduce al desarrollo de lesiones osteoblásticas. La comunicación entre las células de CaP y las células óseas en entornos óseos rige tanto la formación/desarrollo de la lesión asociada como el crecimiento del tumor secundario. Usando osteoblastos como sistema modelo, observamos que las células de CaP y su medio condicionado podían estimular e incrementar la mineralización y la diferenciación de los osteoblastos. Los factores secretados en el medio condicionado de CaP responsables de los cambios osteoblásticos incluían pequeñas vesículas extracelulares (sEVs), que eran suficientes para impulsar la osteoblastogénesis. Usando MiR-seq, perfilamos el contenido de miARN de los sEVs de CaP, mostrando que miR-16-5p estaba altamente expresado. MiR-16 fue posteriormente más alto en las células 7F2 tratadas con EV y un mimético de miR-16 también pudo estimular la mineralización. A continuación, usando RNA-seq de células 7F2 tratadas con vesículas extracelulares (EV), observamos un gran grado de regulación a la baja de genes y un aumento en la mineralización. El Análisis de Vías de Ingenuidad (IPA) reveló que miR-16-5p (y otros miRs) era un probable efector ascendente. Los objetivos de miR-16-5p en las células 7F2, posiblemente involucrados en la osteoblastogénesis, fueron incluidos para validación, a saber, AXIN2, PLSCR4, ADRB2 y DLL1. Luego confirmamos la dirección y regulación a la baja de estos genes por miR-16-5p de sEV usando reporteros UTR (región no traducida) de luciferasa. Por el contrario, la sobreexpresión de PLSCR4, ADRB2 y DLL1 condujo a una disminución de la osteoblastogénesis. Estos resultados indican que miR-16 es un inductor de la osteoblastogénesis y se transmite a través de sEVs derivados del cáncer de próstata. El mecanismo es un probable contribuyente hacia la formación de lesiones osteoblásticas en el CaP metastásico.