Los carotenoides son un grupo abundante de antioxidantes solubles en lípidos en los granos de maíz. El maíz es un cultivo clave para la biofortificación de carotenoides, centrado en el uso de la mejora convencional de plantas en germoplasma nativo de áreas templadas, que se remonta parcialmente a cultivares tradicionales (razas locales). En este estudio, los objetivos fueron determinar la variabilidad de los contenidos de luteína (LUT), zeaxantina (ZEA), alfa-criptoxantina (alphaCX), beta-criptoxantina (betaCX), alfa-caroteno (alphaC) y beta-caroteno (betaC) en el grano de 88 accesiones de maíz templado de la genoteca croata, y evaluar las relaciones entre los contenidos de diferentes carotenoides, así como las relaciones entre el color y la dureza del grano y el contenido de carotenoides. Se detectó una variabilidad altamente significativa entre las 88 accesiones para todos los carotenoides. En promedio, el carotenoide más abundante fue LUT con 13.2 g g, seguido de ZEA con 6.8 g g de materia seca. Un análisis de componentes principales reveló una clara distinción entre los carotenoides de rama alfa (LUT, alphaCX y alphaC) y de rama beta (ZEA; betaCX y betaC). Los carotenoides de rama beta estaban correlacionados positivamente con el color del grano y débilmente asociados con la dureza del grano. Nuestros resultados sugieren que algunas accesiones de la genoteca con un cierto porcentaje de germoplasma nativo pueden ser una buena fuente de biofortificación de carotenoides en el sureste de Europa. Sin embargo, debido a la falta de asociación entre LUT y ZEA, el proceso de mejora podría ser complicado.