Los intervalos de referencia para los analitos de química clínica y hematología son esenciales para la interpretación de los resultados sanguíneos, pero hay datos limitados disponibles para los pingüinos de Humboldt en colecciones zoológicas así como en la naturaleza. El objetivo del presente estudio fue, por lo tanto, establecer intervalos de referencia para una serie de analitos de química clínica y hematología en una única población zoológica de pingüinos de Humboldt. Además, se investigaron las posibles variaciones de los analitos influenciadas por la edad y el sexo de los individuos. Se analizaron y evaluaron estadísticamente muestras de plasma heparinizado de litio y sangre total de 39 animales. Los siguientes analitos de química clínica fueron significativamente más altos en las hembras: deshidrogenasa de glutamato (p = 0.0003), alanina transaminasa (p = 0.0005), fosfatasa alcalina (p = 0.0245), aspartato aminotransferasa (p = 0.0043), creatina quinasa (p = 0.0016), lactato deshidrogenasa (p < 0.0001), fósforo inorgánico (p = 0.0223) y sodio (p = 0.0415). No se encontraron diferencias significativas entre machos y hembras para ningún analito de hematología. El colesterol (p = 0.0233; -0.39), el recuento de glóbulos blancos (p = 0.0208; -0.40) y los heterófilos absolutos (p = 0.0148; -0.42) tuvieron correlaciones negativas significativas con la edad de los pingüinos. Los resultados indican que los factores de sexo y edad deben ser considerados al interpretar los resultados de los ensayos hematológicos y de bioquímica clínica, y se necesitan más estudios para determinar si hay más diferencias en otros grupos de edad o estaciones.