La medición de metabolitos de cortisol/corticosterona fecales (FCMs) se utiliza a menudo para cuantificar la respuesta al estrés. El método de muestreo es relativamente no invasivo, reduce la preocupación por la elevación de cortisol debido al método de muestreo y ha demostrado medir el cortisol de manera más consistente sin el ritmo diurno diario observado en la sangre. Los kits comerciales de ELISA (ensayo inmunoenzimático ligado a enzimas) ofrecen beneficios sobre los métodos de ensayo inmunológico previamente validados, pero carecen de validación. El objetivo de este estudio fue evaluar un kit comercial de ELISA (kit de ELISA de cortisol Arbor Assays DetectX, K003-H1, Ann Arbor, MI, EE. UU.) y proporcionar validación analítica y biológica de muestras fecales y de plasma equino. Los caballos (4 machos, 4 hembras, media +/- DE: 4 +/- 5 años) fueron transportados durante 15 minutos con contacto físico y visual limitado a través de un remolque de ganado. Se recolectaron muestras de sangre y fecales antes y después del transporte. Se utilizaron pruebas de paralelismo, precisión y exactitud para validar analíticamente este kit. Los datos se analizaron utilizando PROC MIXED en SAS 9.4. Las concentraciones de cortisol en plasma aumentaron en respuesta al transporte (254.5 +/- 26.4 nmol/L, 0 minutos después del transporte) en comparación con el pre-transporte (142.8 +/- 26.4 nmol/L). Las concentraciones de FCM aumentaron 24 horas después del transporte (10.8 +/- 1.7 ng/g) en comparación con el pre-transporte (7.4 +/- 1.7 ng/g). Estos datos apoyan que los cambios en los FCMs pueden observarse 24 horas después del estresor. En conclusión, el kit de ELISA de cortisol Arbor Assays DetectX es una opción confiable y económica para la medición de cambios biológicamente relevantes en el cortisol en plasma equino y FCMs.