Validación de genes de referencia para RT-qPCR en PBMC de pacientes asmáticos con o sin obesidad
Autores: Bantulà, Marina; Arismendi, Ebymar; Picado, César; Mullol, Joaquim; Roca-Ferrer, Jordi; Tubita, Valeria
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2022
Acceso abierto
Artículo científico
2022
Validación de genes de referencia para RT-qPCR en PBMC de pacientes asmáticos con o sin obesidad
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Obesidad
Medicamentos glucocorticoides
Expresión génica
Genes de referencia
Pacientes asmáticos
Genes inducidos por glucocorticoides
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 17
Citaciones: Sin citaciones
La obesidad se sabe que afecta la eficacia de los medicamentos glucocorticoides para el control del asma. Los estudios de expresión génica inducida por glucocorticoides pueden ser útiles para discriminar a aquellos pacientes asmáticos obesos que presentan una mala respuesta a los glucocorticoides. La expresión de genes de interés se normaliza con respecto a genes de referencia (GR). Idealmente, los GR tienen una expresión estable en diferentes muestras y no se ven afectados por las condiciones experimentales. El objetivo de este trabajo fue analizar los GR adecuados para estudiar el papel de los genes inducidos por glucocorticoides en pacientes asmáticos obesos en futuras investigaciones. La expresión génica de ocho posibles GR (, , , , , , , y ) fue evaluada mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa de transcripción inversa en células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de individuos asmáticos, asmáticos obesos y sanos. Su estabilidad fue analizada utilizando cuatro algoritmos diferentes: BestKeeper, Ct, geNorm y NormFinder. El análisis de geNorm recomendó el uso de un mínimo de tres genes para la normalización. Además, la variación intergrupal debida al tratamiento fue calculada por NormFinder, que encontró que era el gen menos afectado por diferentes tratamientos. Las clasificaciones completas indicaron y como los mejores GR para qPCR en CMSP de sujetos sanos y asmáticos, mientras que y fueron los mejores para sujetos asmáticos obesos. Finalmente, nuestros resultados demostraron que y fueron los GR más estables entre todos los grupos, mientras que , y fueron los peores compartidos.
Descripción
La obesidad se sabe que afecta la eficacia de los medicamentos glucocorticoides para el control del asma. Los estudios de expresión génica inducida por glucocorticoides pueden ser útiles para discriminar a aquellos pacientes asmáticos obesos que presentan una mala respuesta a los glucocorticoides. La expresión de genes de interés se normaliza con respecto a genes de referencia (GR). Idealmente, los GR tienen una expresión estable en diferentes muestras y no se ven afectados por las condiciones experimentales. El objetivo de este trabajo fue analizar los GR adecuados para estudiar el papel de los genes inducidos por glucocorticoides en pacientes asmáticos obesos en futuras investigaciones. La expresión génica de ocho posibles GR (, , , , , , , y ) fue evaluada mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa de transcripción inversa en células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de individuos asmáticos, asmáticos obesos y sanos. Su estabilidad fue analizada utilizando cuatro algoritmos diferentes: BestKeeper, Ct, geNorm y NormFinder. El análisis de geNorm recomendó el uso de un mínimo de tres genes para la normalización. Además, la variación intergrupal debida al tratamiento fue calculada por NormFinder, que encontró que era el gen menos afectado por diferentes tratamientos. Las clasificaciones completas indicaron y como los mejores GR para qPCR en CMSP de sujetos sanos y asmáticos, mientras que y fueron los mejores para sujetos asmáticos obesos. Finalmente, nuestros resultados demostraron que y fueron los GR más estables entre todos los grupos, mientras que , y fueron los peores compartidos.