La alfa-amilasa salival (sAA) aumenta en respuesta a estímulos estresantes en diferentes especies animales, lo que indica la activación del sistema nervioso simpático. Sin embargo, la sAA nunca se ha medido en gatos. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue realizar una validación analítica y clínica de un ensayo automatizado disponible comercialmente para evaluar su idoneidad para la determinación de sAA en saliva felina. Los resultados obtenidos indican que la sAA se puede medir con precisión en la saliva felina utilizando un método automatizado disponible comercialmente. Además, cuando se evaluó la respuesta al estrés, se detectó un aumento significativo en la actividad de sAA en comparación con sus niveles antes de la extracción de sangre. Además, los gatos con patologías del tracto urinario presentaron una mayor actividad de sAA que los controles sanos. Por lo tanto, los hallazgos de este estudio indican que la sAA se puede medir en la saliva felina y que puede tener un uso potencial como biomarcador de estrés.