Desde el brote del virus de la influenza aviar H9N2/Y439 en 1996, la industria avícola de Corea ha sufrido graves pérdidas económicas. Un nuevo virus H9N2 posiblemente zoonótico de la línea Y280 (H9N2/Y280) ha estado presente en Corea desde junio de 2020, representando una amenaza para el sector avícola. La rápida mutación de los virus de la influenza exige el desarrollo de vacunas efectivas contra las cepas recién generadas. Así, diseñamos un virus recombinante rHVT/Y280 para combatir el H9N2/Y280. Integramos el gen de hemaglutinina de la cepa H9N2/Y280 en la región US2 de la cepa de vacuna del herpesvirus de pavos (HVT) Fc126, utilizando la tecnología de edición genética CRISPR/Cas9. La construcción exitosa de rHVT/Y280 fue confirmada por reacción en cadena de la polimerasa y secuenciación, seguida de una evaluación de eficacia. Pollos específicos libres de patógenos de cuatro días recibieron la vacuna rHVT/Y280 y fueron desafiados con la cepa H9N2/Y280 A21-MRA-003 a las 3 semanas después de la vacunación. En 5 días, no hubo lesiones evidentes entre los pollos vacunados. La vacuna rHVT/Y280 indujo una fuerte inmunidad humoral y redujo notablemente la eliminación del virus, logrando una inhibición del 100% de la recuperación del virus en las amígdalas cecales y disminuyendo significativamente la carga viral en los tejidos. Por lo tanto, las vacunas vectoriales HVT que expresan HA pueden ser utilizadas para proteger a las aves de corral contra el H9N2/Y280. La inducción de inmunidad humoral por vacunas vivas es vital en tales casos. En resumen, el virus recombinante rHVT/Y280 es un candidato prometedor para la vacunación de pollos contra el H9N2/Y280.