La encefalopatía y retinopatía viral (VER) es una enfermedad infecciosa neurológica en peces que causa vacuolización y necrosis en el sistema nervioso central, lo que lleva a anormalidades en la natación y, en general, a la muerte del hospedador en las primeras etapas de desarrollo. La VER es causada por el virus de la necrosis nerviosa (NNV), un virus no envuelto con un genoma de ARN bisegmentado y de cadena positiva (+). El segmento más grande (ARN1) codifica para la polimerasa viral, mientras que la proteína de la cápside es codificada por ARN2. El objetivo de este estudio fue explorar el potencial de una cepa RGNNV/SJNNV de ingeniería inversa que alberga mutaciones en ambos 3NCRs (posición 3073 de ARN1 y 1408 y 1412 de ARN2) como una vacuna viva atenuada para el lenguado. La atenuación de esta cepa se confirmó a través de infecciones experimentales en lenguados a 22 grados C. Se realizaron ensayos de vacunación mediante baño, inyección intramuscular e intraperitoneal, a dos temperaturas (18 y 22 grados C). Nuestros resultados indican una mejor supervivencia de los peces vacunados y una replicación viral retrasada y más pobre, así como una sobreexpresión de genes de respuesta inmune vinculados a marcadores de células T, a una respuesta inflamatoria temprana y a la actividad antiviral. En conclusión, nuestro estudio indica que la cepa atenuada es un buen candidato a vacuna, ya que favorece la supervivencia del lenguado tras la infección con la cepa wt mientras induce una respuesta inmune significativa.