Los péptidos restringidos son una clase atractiva como reactivos de afinidad o como candidatos a fármacos debido a sus excelentes propiedades de unión. Muchos tipos de estos péptidos, como los péptidos cíclicos que contienen puentes de disulfuro, se encuentran en la naturaleza o se diseñan artificialmente mediante evolución dirigida. Sin embargo, confirmar las propiedades de unión de los péptidos ricos en disulfuro puede ser generalmente difícil, debido a problemas de plegamiento oxidativo en los pasos de preparación. Por lo tanto, se requiere un método para evaluar las propiedades de unión de tales péptidos de manera rápida y sencilla. Aquí, informamos sobre un método fácil y rápido para preparar péptidos unidos a biotina que contienen puentes de disulfuro o un cruzador químico utilizando un sistema de traducción libre de células y un enlazador de puromicina, que es aplicable a ensayos de captura para el análisis de interacción molecular de proteínas (o péptidos).