La unión de espermatozoides y neutrófilos es un aspecto importante de la reproducción y afecta significativamente la fertilidad. Si bien se ha encontrado que una proteína específica del plasma seminal reduce esta unión y mejora la fertilidad (CRISP-3), parece que moléculas adicionales promueven la unión entre espermatozoides defectuosos y neutrófilos. Trabajos recientes han sugerido que una de estas proteínas es la lactoferrina (LF), una proteína de unión al hierro de 80 kDa que se encuentra en todo el cuerpo, pero no se confirmó la pureza de la proteína. Se desconoce si la LF se une a los espermatozoides de manera selectiva según la viabilidad, y si los receptores de LF están ubicados en los espermatozoides equinos. Para evaluar esto, intentamos purificar la LF seminal equina de cinco sementales (n = 5), biotinilar la LF y evaluar los posibles sitios de unión en los espermatozoides. La LF se asoció consistentemente con la superóxido dismutasa (SOD-3), y todos los intentos de separar las dos proteínas fueron infructuosos. Se utilizaron análisis de citometría de flujo y microscopía para comparar la unión LF/SOD-3 a espermatozoides viables y no viables. Además, se evaluaron varios métodos de biotinilación para optimizar esta metodología. La biotinilación de la proteína del plasma seminal fue un método efectivo y eficiente para estudiar las propiedades de la proteína del plasma seminal, y se encontró que el sitio de unión para LF/SOD-3 estaba ampliamente localizado en toda la superficie celular del espermatozoide, así como selectivo hacia espermatozoides no viables/defectuosos. Aunque no pudimos determinar si la unión a los espermatozoides equinos fue a través de LF o SOD-3, podemos concluir que la LF seminal equina está fuertemente unida a SOD-3 y que este complejo proteico se une selectivamente a espermatozoides no viables, posiblemente para marcarlos para su eliminación por fagocitosis de neutrófilos.