Un técnica mejorada para genotipificar la variante genética del gen Exón 21
Autores: Zuccoli, Johanna Romina; Pagnotta, Priscila Ayelén; Melito, Viviana Alicia; Lavandera, Jimena Verónica; Parera, Victoria Estela; Buzaleh, Ana María
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2023
Acceso abierto
Artículo científico
2023
Un técnica mejorada para genotipificar la variante genética del gen Exón 21
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Proteína de resistencia a múltiples fármacos
Xenobióticos
Fármacos antirretrovirales
Exón 12
Exón 21
Exón 26
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 32
Citaciones: Sin citaciones
La proteína de resistencia a múltiples fármacos está involucrada en el transporte de xenobióticos y fármacos antirretrovirales. Algunas variantes del gen son de importancia clínica; entre ellas, el exón 12 (c.1236C>T, rs1128503), 21 (c.2677G>T/A, rs2032582) y 26 (c.3435C>T, rs1045642) tienen una alta incidencia en caucásicos. Se han utilizado varios protocolos para la genotipificación de las variantes del exón 21, como la PCR-RFLP específica de alelos utilizando cebadores adaptados para generar un sitio de digestión para varios enzimas y secuenciación automática para detectar los SNVs, el ensayo de discriminación de alelos TaqMan y el análisis de fusor de alta resolución (HRMA). El objetivo fue describir un nuevo enfoque para genotipificar las tres variantes c.2677G>T/A para el exón 21 realizando solo una PCR con los cebadores correspondientes y la digestión del producto de PCR con dos enzimas de restricción: para identificar el alelo A y diferenciar entre G o T. También se describió una mejora de esta metodología. La técnica propuesta aquí descrita se demostró ser muy eficiente, fácil, rápida, reproducible y rentable.
Descripción
La proteína de resistencia a múltiples fármacos está involucrada en el transporte de xenobióticos y fármacos antirretrovirales. Algunas variantes del gen son de importancia clínica; entre ellas, el exón 12 (c.1236C>T, rs1128503), 21 (c.2677G>T/A, rs2032582) y 26 (c.3435C>T, rs1045642) tienen una alta incidencia en caucásicos. Se han utilizado varios protocolos para la genotipificación de las variantes del exón 21, como la PCR-RFLP específica de alelos utilizando cebadores adaptados para generar un sitio de digestión para varios enzimas y secuenciación automática para detectar los SNVs, el ensayo de discriminación de alelos TaqMan y el análisis de fusor de alta resolución (HRMA). El objetivo fue describir un nuevo enfoque para genotipificar las tres variantes c.2677G>T/A para el exón 21 realizando solo una PCR con los cebadores correspondientes y la digestión del producto de PCR con dos enzimas de restricción: para identificar el alelo A y diferenciar entre G o T. También se describió una mejora de esta metodología. La técnica propuesta aquí descrita se demostró ser muy eficiente, fácil, rápida, reproducible y rentable.