La variedad de fresa cultivada octoploide Benihope (x Duch cv. Benihope) es una planta comercial importante. Es altamente susceptible a diferentes enfermedades, lo que finalmente conduce a una reducción en el rendimiento. Los métodos de edición genética, como CRISPR/Cas9, demuestran potencial para mejorar la resistencia a enfermedades en la fresa cv. Benihope. Establecer un sistema de regeneración de plantas adecuado para la edición genética CRISPR/Cas9 es crucial para obtener plantas transgénicas a gran escala. Esta investigación estableció un sistema de inducción de callos y regeneración de plantas para la edición genética CRISPR/Cas9 mediada por -evaluando múltiples tipos de explantes y varios reguladores del crecimiento de plantas a lo largo de todo el proceso de cultivo de tejidos. Los resultados mostraron que la eficiencia de inducción de callos está fuertemente influenciada por el tipo de explante y es altamente sensible a la combinación de reguladores del crecimiento de plantas. Entre los diferentes reguladores del crecimiento de plantas empleados, el tiazurón (TDZ), en combinación con ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), indujo eficazmente la formación de callos y la regeneración de plantas a partir de explantes derivados de tejidos nutritivos como las puntas de los corredores y las coronas. Además, el experimento de regeneración demostró que la adición de polivinilpirrolidona (PVPP) al medio de regeneración de brotes podría inhibir el pardeamiento del tejido. Las plantas editadas genéticamente en las que algunos o todos los genes en la familia de genes MLO () fueron eliminados por el sistema CRISPR/Cas9 se obtuvieron aplicando el sistema de regeneración de plantas desarrollado en este estudio.