Un nuevo aptámero de ssDNA que se dirige al antígeno carcinoembrionario: selección y caracterización
Autores: Yunussova, Nigara; Sypabekova, Marzhan; Zhumabekova, Zhazira; Matkarimov, Bakhyt; Kanayeva, Damira
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2022
Acceso abierto
Artículo científico
2022
Un nuevo aptámero de ssDNA que se dirige al antígeno carcinoembrionario: selección y caracterización
Categoría
Ciencias Naturales y Subdisciplinas
Subcategoría
Biología
Palabras clave
Cáncer
Aptámeros
Diagnósticos
SELEX
NGS
Especificidad
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 18
Citaciones: Sin citaciones
Una de las principales causas de una expectativa de vida drásticamente más corta y una de las enfermedades más prevalentes en el mundo hoy en día es el cáncer. Dado los datos sobre el aumento de casos de cáncer en todo el mundo, es obvio que, a pesar de las técnicas de diagnóstico que se están utilizando actualmente, hay una necesidad urgente de desarrollar técnicas precisas y sensibles para el diagnóstico temprano de la enfermedad. Un alto grado de afinidad y especificidad hacia objetivos particulares es mantenido por las moléculas de ácido nucleico cortas conocidas como aptámeros. Los aptámeros superan a los anticuerpos debido a sus beneficios únicos, como su simplicidad en la síntesis y modificación, la falta de toxicidad y la estabilidad a largo plazo. Utilizando un elemento de reconocimiento preciso y un robusto mecanismo de transducción de señales, los diagnósticos moleculares pueden ser extremadamente sensibles y específicos. En este estudio, se logró el desarrollo de nuevos aptámeros de ADN de cadena sencilla contra CEA para su uso en diagnósticos de cáncer utilizando métodos SELEX y NGS. Como resultado de 12 rondas iterativas de SELEX, se desarrollaron nueve candidatos a aptámeros contra CEA. El análisis comparativo de NGS reveló que la ronda doce tenía un número enriquecido de aptámeros que se unieron específicamente, en contraste con la ronda ocho. Entre las nueve secuencias seleccionadas caracterizadas por análisis bioinformático y ELONA, se identificó una secuencia de aptámero con la mayor especificidad y afinidad por la proteína objetivo, que fue examinada más a fondo. La secuencia de aptámero (6) fue evaluada en un ensayo dependiente de concentración, se realizó un análisis de especificidad y se predijeron sus posibles estructuras secundarias y terciarias, lo que nos permitió probar una de las posibles interacciones putativas con CEA. Finalmente, la secuencia de aptámero (6) etiquetada con una etiqueta fluorescente Cy5 se utilizó en microscopía confocal para observar su unión hacia el CEA expresado en la línea celular de adenocarcinoma de colon humano HT-29.
Descripción
Una de las principales causas de una expectativa de vida drásticamente más corta y una de las enfermedades más prevalentes en el mundo hoy en día es el cáncer. Dado los datos sobre el aumento de casos de cáncer en todo el mundo, es obvio que, a pesar de las técnicas de diagnóstico que se están utilizando actualmente, hay una necesidad urgente de desarrollar técnicas precisas y sensibles para el diagnóstico temprano de la enfermedad. Un alto grado de afinidad y especificidad hacia objetivos particulares es mantenido por las moléculas de ácido nucleico cortas conocidas como aptámeros. Los aptámeros superan a los anticuerpos debido a sus beneficios únicos, como su simplicidad en la síntesis y modificación, la falta de toxicidad y la estabilidad a largo plazo. Utilizando un elemento de reconocimiento preciso y un robusto mecanismo de transducción de señales, los diagnósticos moleculares pueden ser extremadamente sensibles y específicos. En este estudio, se logró el desarrollo de nuevos aptámeros de ADN de cadena sencilla contra CEA para su uso en diagnósticos de cáncer utilizando métodos SELEX y NGS. Como resultado de 12 rondas iterativas de SELEX, se desarrollaron nueve candidatos a aptámeros contra CEA. El análisis comparativo de NGS reveló que la ronda doce tenía un número enriquecido de aptámeros que se unieron específicamente, en contraste con la ronda ocho. Entre las nueve secuencias seleccionadas caracterizadas por análisis bioinformático y ELONA, se identificó una secuencia de aptámero con la mayor especificidad y afinidad por la proteína objetivo, que fue examinada más a fondo. La secuencia de aptámero (6) fue evaluada en un ensayo dependiente de concentración, se realizó un análisis de especificidad y se predijeron sus posibles estructuras secundarias y terciarias, lo que nos permitió probar una de las posibles interacciones putativas con CEA. Finalmente, la secuencia de aptámero (6) etiquetada con una etiqueta fluorescente Cy5 se utilizó en microscopía confocal para observar su unión hacia el CEA expresado en la línea celular de adenocarcinoma de colon humano HT-29.