En este estudio presentamos un esquema para la determinación cuantitativa de la viabilidad de biofilms que ofrece una mejora significativa sobre los métodos existentes con ensayos metabólicos. Los ensayos metabólicos existentes para cuantificar bacterias viables en biofilms suelen utilizar curvas de calibración derivadas de bacterias planctónicas, lo que puede introducir grandes errores debido a las diferencias significativas en las tasas metabólicas y/o de crecimiento de las bacterias del biofilm en los medios de ensayo en comparación con sus contrapartes planctónicas. En el método presentado, derivamos la tasa de crecimiento específica de las bacterias del biofilm a partir de una serie de ensayos metabólicos utilizando el indicador de pH rojo fenol, y mostramos que esta información podría utilizarse para cuantificar de manera más precisa el número relativo de bacterias viables en un biofilm. Encontramos que la tasa de crecimiento específica en modo de crecimiento de biofilm fue de 0.70 h, en comparación con 1.09 h en crecimiento planctónico. Este método debería ser aplicable a otros tipos de bacterias, así como a otros ensayos metabólicos, y, por ejemplo, para cuantificar el efecto de tratamientos antibacterianos o el rendimiento de superficies de implantes bactericidas.