La determinación precisa de la localización de proteínas, niveles o interacciones proteína-proteína es fundamental para el estudio de su función, y el etiquetado de proteínas in situ a través de recombinación homóloga ha surgido como una herramienta crítica en muchos organismos. Si bien este enfoque se ha refinado en varios hongos modelo, el estudio de la función de las proteínas en la mayoría de los patógenos de plantas se ha basado predominantemente en manipulaciones ex situ o de sobreexpresión. Para desentrañar los mecanismos moleculares del desarrollo y la infección de , un formidable patógeno de plantas responsable de enfermedades de marchitez vascular, hemos establecido una estrategia robusta de etiquetado de proteínas in situ basada en recombinación homóloga en este organismo. Utilizando la transformación mediada por - (ATMT), esta metodología facilita el etiquetado preciso de proteínas específicas en sus extremos C con epítopos, como GFP y Flag, dentro del contexto nativo de . Demostramos la eficacia de nuestro enfoque a través del etiquetado in situ de y , seguido de la confirmación posterior mediante análisis de localización subcelular y a nivel de proteínas. Nuestros hallazgos confirman la aplicabilidad de la recombinación homóloga para el etiquetado de proteínas in situ en y sugieren su potencial utilidad en un amplio espectro de hongos filamentosos. Este método de etiquetado tiene el potencial de avanzar significativamente en el campo de la genómica funcional en hongos patógenos de plantas, ofreciendo una herramienta versátil y poderosa para la elucidación de la función de las proteínas.