Un método de transformación genética mediada eficiente para el callo embriogénico de Cav
Autores: Cordeiro, Daniela; Alves, Ana; Ferraz, Ricardo; Casimiro, Bruno; Canhoto, Jorge; Correia, Sandra
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2023
Acceso abierto
Artículo científico
2023
Un método de transformación genética mediada eficiente para el callo embriogénico de Cav
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Botánica
Palabras clave
Embriogénesis somática
Transformación genética
Tamarillo
Callo
Antibióticos
Ensayo GUS
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 11
Citaciones: Sin citaciones
La embriogénesis somática en tamarillo ha demostrado ser un sistema modelo efectivo para estudiar la morfogénesis, ya que se disponen de protocolos de regeneración de plantas optimizados y se pueden inducir líneas celulares competentes embriogénicamente a partir de diferentes explantes. Sin embargo, aún no se ha implementado un sistema de transformación genética eficiente para el callo embriogénico (EC) en esta especie. Aquí se describe un protocolo optimizado y más rápido de transformación genética para EC. Se determinó la sensibilidad del EC a tres antibióticos, y la kanamicina demostró ser el mejor agente selectivo para el callo de tamarillo. Se utilizaron dos cepas, EHA105 y LBA4404, ambas portadoras del plásmido p35SGUSINT, que lleva el gen reportero para beta-glucuronidasa y el gen marcador neomicina fosfotransferasa, para probar la eficiencia del proceso. Para aumentar el éxito de la transformación genética, se emplearon un tratamiento de choque frío, agua de coco, polivinilpirrolidona y un programa de selección apropiado basado en la resistencia a antibióticos. La transformación genética se evaluó mediante el ensayo GUS y técnicas basadas en PCR, y se confirmó una tasa de eficiencia del 100% en los grupos de EC resistentes a la kanamicina. La transformación genética con la cepa EHA105 resultó en valores más altos para la inserción en el genoma. El protocolo presentado proporciona una herramienta útil para el análisis funcional de genes y enfoques biotecnológicos.
Descripción
La embriogénesis somática en tamarillo ha demostrado ser un sistema modelo efectivo para estudiar la morfogénesis, ya que se disponen de protocolos de regeneración de plantas optimizados y se pueden inducir líneas celulares competentes embriogénicamente a partir de diferentes explantes. Sin embargo, aún no se ha implementado un sistema de transformación genética eficiente para el callo embriogénico (EC) en esta especie. Aquí se describe un protocolo optimizado y más rápido de transformación genética para EC. Se determinó la sensibilidad del EC a tres antibióticos, y la kanamicina demostró ser el mejor agente selectivo para el callo de tamarillo. Se utilizaron dos cepas, EHA105 y LBA4404, ambas portadoras del plásmido p35SGUSINT, que lleva el gen reportero para beta-glucuronidasa y el gen marcador neomicina fosfotransferasa, para probar la eficiencia del proceso. Para aumentar el éxito de la transformación genética, se emplearon un tratamiento de choque frío, agua de coco, polivinilpirrolidona y un programa de selección apropiado basado en la resistencia a antibióticos. La transformación genética se evaluó mediante el ensayo GUS y técnicas basadas en PCR, y se confirmó una tasa de eficiencia del 100% en los grupos de EC resistentes a la kanamicina. La transformación genética con la cepa EHA105 resultó en valores más altos para la inserción en el genoma. El protocolo presentado proporciona una herramienta útil para el análisis funcional de genes y enfoques biotecnológicos.