Un ensayo de alto rendimiento basado en polarización de fluorescencia para el dominio SH2 de STAT4
Autores: Berg, Angela; Gräber, Martin; Schmutzler, Sebastian; Hoffmann, Ralf; Berg, Thorsten
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2022
Acceso abierto
Artículo científico
2022
Un ensayo de alto rendimiento basado en polarización de fluorescencia para el dominio SH2 de STAT4
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Transductor de señales
Activación de la transcripción
Proteínas STAT
Dominio SH2
Enfermedades autoinmunes
Inhibidores
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 29
Citaciones: Sin citaciones
Las proteínas del transductor de señales y activación de la transcripción (STAT) son una familia de factores de transcripción que contienen dominios de homología a Src 2 (SH2). El miembro de la familia STAT4 es un mediador de la señalización de IL-12 y ha sido implicado en la patogénesis de múltiples enfermedades autoinmunes. La actividad de STAT4 requiere la unión de motivos que contienen fosfotirosina a su dominio SH2. Hasta la fecha, no se han publicado inhibidores selectivos del dominio SH2 de STAT4. Aquí presentamos un ensayo basado en la polarización de fluorescencia para la identificación de inhibidores del dominio SH2 de STAT4. El ensayo se basa en la interacción entre el dominio SH2 de STAT4 y el péptido marcado con fluoróforo 5-carboxifluoresceína-GpYLPQNID (K = 34 +/- 4 nM). El ensayo es estable con respecto a concentraciones de DMSO de hasta el 10% y tiempos de incubación de al menos 8 h. El valor de Z" de 0.85 +/- 0.01 indica que el ensayo es adecuado para su uso en campañas de cribado de alto rendimiento destinadas a identificar nuevas modalidades terapéuticas para el tratamiento de enfermedades autoinmunes.
Descripción
Las proteínas del transductor de señales y activación de la transcripción (STAT) son una familia de factores de transcripción que contienen dominios de homología a Src 2 (SH2). El miembro de la familia STAT4 es un mediador de la señalización de IL-12 y ha sido implicado en la patogénesis de múltiples enfermedades autoinmunes. La actividad de STAT4 requiere la unión de motivos que contienen fosfotirosina a su dominio SH2. Hasta la fecha, no se han publicado inhibidores selectivos del dominio SH2 de STAT4. Aquí presentamos un ensayo basado en la polarización de fluorescencia para la identificación de inhibidores del dominio SH2 de STAT4. El ensayo se basa en la interacción entre el dominio SH2 de STAT4 y el péptido marcado con fluoróforo 5-carboxifluoresceína-GpYLPQNID (K = 34 +/- 4 nM). El ensayo es estable con respecto a concentraciones de DMSO de hasta el 10% y tiempos de incubación de al menos 8 h. El valor de Z" de 0.85 +/- 0.01 indica que el ensayo es adecuado para su uso en campañas de cribado de alto rendimiento destinadas a identificar nuevas modalidades terapéuticas para el tratamiento de enfermedades autoinmunes.