Un derivatización automatizada de HPLC para el análisis de glutatión y tioles relacionados en L
Autores: Nacca, Francesco; Cozzolino, Concetta; Carillo, Petronia; Woodrow, Pasqualina; Fuggi, Amodio; Ciarmiello, Loredana Filomena
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2021
Acceso abierto
Artículo científico
2021
Un derivatización automatizada de HPLC para el análisis de glutatión y tioles relacionados en L
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Agronomía y Ciencia de los Cultivos
Palabras clave
Glucosinolatos
Glutatión
Tiol
Cisteína
Estrés oxidativo
HPLC
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 81
Citaciones: Sin citaciones
El alto contenido de glucosinolatos y glutatión hace que las Brassicaceae sean un alimento saludable importante. Los tióles y especialmente el glutatión y el tripéptido -Glu-Cys-Gly están involucrados en muchas funciones celulares fundamentales como la protección contra el estrés oxidativo. Aunque actualmente se utilizan varios métodos para el análisis de compuestos de azufre en muestras biológicas, la determinación de glutatión y otros derivados de azufre en tejidos vegetales es bastante problemática debido a su extrema susceptibilidad a la oxidación, lo que puede llevar a una sobreestimación. El objetivo de este trabajo fue mejorar y validar un método automatizado para la determinación de glutatión reducido y oxidado, cisteína y -glutamilcisteína en tejidos vegetales. El método consiste en una derivatización completamente automatizada en pre-columna de tióles basada en un reactivo de monobromobimano, una separación de derivados por cromatografía líquida de alto rendimiento, y una detección y cuantificación fluorimétrica. El método se aplicó con éxito para la determinación de las formas oxidadas y reducidas de Cys, -GC y GSH en hojas, pecíolos, inflorescencias y raíces de L. subsp. Sylvestris. Al momento de la cosecha, en plantas recién cortadas, los contenidos promedio de GSH/2GSSG fueron 840/45, 345/70 y 150/70 nmol g de peso fresco para las flores, hojas y tallos, respectivamente; los de Cys/2Cys fueron 80/12, 29/12 y 24/6 nmol g-1 de peso fresco; mientras que los de -GC/-GCCG- fueron 8.0/4.0, 6.0/3.0 y 3.0/2.0 nmol g de peso fresco, respectivamente. Tales cantidades fueron menores en plantas cultivadas en bajo azufre en la cosecha. El coeficiente de variación muy bajo entre pruebas repetidas (máximo 1.6%), la alta recuperación del estándar interno (>96%) y el coeficiente de correlación lineal de la calibración (R > 0.99) respaldan la eficiencia de este método que permitió analizar alrededor de 50 muestras/día de forma totalmente automatizada sin intervención del operador. Nuestros resultados muestran que las integraciones del método reportado pueden mejorar significativamente la detección de tióles a través de HPLC.
Descripción
El alto contenido de glucosinolatos y glutatión hace que las Brassicaceae sean un alimento saludable importante. Los tióles y especialmente el glutatión y el tripéptido -Glu-Cys-Gly están involucrados en muchas funciones celulares fundamentales como la protección contra el estrés oxidativo. Aunque actualmente se utilizan varios métodos para el análisis de compuestos de azufre en muestras biológicas, la determinación de glutatión y otros derivados de azufre en tejidos vegetales es bastante problemática debido a su extrema susceptibilidad a la oxidación, lo que puede llevar a una sobreestimación. El objetivo de este trabajo fue mejorar y validar un método automatizado para la determinación de glutatión reducido y oxidado, cisteína y -glutamilcisteína en tejidos vegetales. El método consiste en una derivatización completamente automatizada en pre-columna de tióles basada en un reactivo de monobromobimano, una separación de derivados por cromatografía líquida de alto rendimiento, y una detección y cuantificación fluorimétrica. El método se aplicó con éxito para la determinación de las formas oxidadas y reducidas de Cys, -GC y GSH en hojas, pecíolos, inflorescencias y raíces de L. subsp. Sylvestris. Al momento de la cosecha, en plantas recién cortadas, los contenidos promedio de GSH/2GSSG fueron 840/45, 345/70 y 150/70 nmol g de peso fresco para las flores, hojas y tallos, respectivamente; los de Cys/2Cys fueron 80/12, 29/12 y 24/6 nmol g-1 de peso fresco; mientras que los de -GC/-GCCG- fueron 8.0/4.0, 6.0/3.0 y 3.0/2.0 nmol g de peso fresco, respectivamente. Tales cantidades fueron menores en plantas cultivadas en bajo azufre en la cosecha. El coeficiente de variación muy bajo entre pruebas repetidas (máximo 1.6%), la alta recuperación del estándar interno (>96%) y el coeficiente de correlación lineal de la calibración (R > 0.99) respaldan la eficiencia de este método que permitió analizar alrededor de 50 muestras/día de forma totalmente automatizada sin intervención del operador. Nuestros resultados muestran que las integraciones del método reportado pueden mejorar significativamente la detección de tióles a través de HPLC.