Los reguladores del crecimiento de las plantas (RGP) juegan un papel vital en la inducción de la morfogénesis in vitro. Los RGP sintéticos se utilizan comúnmente para inducir la organogénesis y la embriogénesis somática a partir de varios explantes, mientras que las sustancias naturales se utilizan raramente. Este estudio tuvo como objetivo mejorar la respuesta regenerativa en explantes de hoja utilizando extracto de hoja de Tulsi y elucidar las interacciones bioquímicas durante la modulación de los reguladores del crecimiento de las plantas endógenos, incluyendo ácido indol-3-acético (IAA), ácido abscísico (ABA), zeatina y 6-(, -dimetilalilamino) purina (2iP). El extracto de hoja de Tulsi mejoró significativamente la producción de brotes a través de interacciones entre hormonas endógenas y las presentes en el extracto, lo que mejoró la mitigación del estrés. El tratamiento con extracto de hoja de Tulsi al 20% produjo significativamente más brotes que el control, coincidiendo con el aumento de los niveles endógenos de IAA y zeatina a partir del día 10 en cultivo. Además, las concentraciones de ABA y zeatina aumentaron en los días 15 y 25, respectivamente, en el tratamiento con extracto de Tulsi al 20%, sugiriendo su papel en la inducción de estructuras similares a embriones somáticos. El ABA probablemente actúa como un activador de las respuestas al estrés, fomentando el desarrollo de estas estructuras. Además, el 2iP estuvo involucrado en la inducción de ambas formas de regeneración en los tratamientos de extracto al 10% y al 20%, especialmente en combinación con ABA. Estos resultados sugieren que el extracto de hoja de Tulsi tiene un potencial prometedor como suplemento natural para aumentar la regeneración de plantas in vitro y avanzar en nuestra comprensión de cómo los extractos naturales de origen vegetal pueden ser aprovechados para optimizar los procesos de regeneración de plantas in vitro.