Durante la última década, ha habido un fuerte interés en las landraces y variedades históricas de trigo por parte de agricultores, fabricantes y consumidores. Son interesantes desde el punto de vista agronómico y nutricional, pero la cadena de suministro (desde la semilla hasta el producto final) no es sólida y rastreable. Los gluteninas de alto peso molecular (HMW-GS) pueden actuar como marcadores para rastrear la correspondencia varietal y verificar la pureza genética del grano y, en consecuencia, de las harinas, comercializadas y etiquetadas como mono-varietales. En el presente trabajo, se analizaron las HMW-GS de diferentes landraces de trigo duro sicilianos (Timilia, Russello, Perciasacchi) y una variedad histórica Margherito. Al principio, perfiles proteicos específicos fueron asignados a cada landrace siciliana mediante análisis de SDS-PAGE y MALDI-TOF/MS, gracias a la disponibilidad de semillas puras. Luego se llevaron a cabo análisis de los perfiles proteicos a partir de muestras aleatorias de lotes de semillas de las mismas landraces cultivadas en una granja en el sureste de Sicilia. Los resultados destacaron la presencia de diferentes bandas proteicas dentro de los lotes de semillas individuales, lo que se refleja en perfiles complejos en las harinas comerciales correspondientes etiquetadas como mono-varietales. La landrace de trigo pan Maiorca cultivada en la misma granja también se encontró como un contaminante en diferentes porcentajes en los lotes de trigo duro. Los resultados de este estudio ofrecen oportunidades para mejorar la cadena de suministro de las diferentes landraces sicilianas o variedades históricas cultivadas, subrayando la necesidad de controles precisos desde el campo hasta el proceso de transformación para ser etiquetados como productos mono-varietales.