Los Campos de Tratamiento de Tumores (TTFields), una nueva vía terapéutica, están aprobados para el tratamiento del glioblastoma multiforme, el mesotelioma pleural maligno y el cáncer de pulmón no microcítico metastásico (NSCLC). En el adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC), se están llevando a cabo varios ensayos clínicos para mejorar los resultados, sin embargo, persiste una brecha de conocimiento significativa relacionada con la interacción entre las células y la matriz extracelular (ECM). En este contexto, hipotetizamos que el tratamiento con TTFields influye en esta interacción, lo que se refleja en la alteración dinámica de las propiedades nanomecánicas (NMPs) de las células y la ECM en un sistema de co-cultivo. Empleamos un gel de ECM que comprende colágeno, fibronectina y laminina mezclados en una estequiometría de 100:1:1 para co-cultivar Panc1 y AsPC1 individualmente. Esta mezcla de ECM imita de cerca el microambiente tumoral in vivo en comparación con los componentes individuales de ECM estudiados anteriormente. Un estudio exhaustivo dependiente de la frecuencia reveló que la frecuencia óptima de TTFields es de 150 kHz. También observamos que, independientemente de la presencia de la ECM, los TTFields aumentan la rigidez de la membrana celular y disminuyen la deformación varias veces en ambas células Panc1 y AsPC1 a las 48 h y 72 h. Aunque la adhesión de AsPC1 disminuyó a las 48 h, a las 72 h se observó que aumentaba independientemente de la presencia de la ECM. Además, altera significativamente las NMPs de los geles de ECM cuando se co-cultivan con líneas celulares de PDAC. Sin embargo, se observó que las células AsPC1 eran más perjudiciales para estos cambios. Por último, atribuimos los cambios de rigidez en las células Panc1 a la reorganización del F-actina de la membrana en presencia de TTFields. Este estudio abre un camino para estudiar el complejo microambiente tumoral de PDAC, así como el efecto de varios agentes quimioterapéuticos en dicho microambiente tumoral con TTFields en el futuro.