Este estudio tuvo como objetivo investigar el efecto de la luz [un fotoperíodo de días largos (16 h de luz/8 h de oscuridad)] y el tratamiento en oscuridad sobre la producción de ácido rosmarínico en microgreens y determinar sus actividades antioxidantes y antibacterianas. Los microgreens se cultivaron bajo condiciones de luz y oscuridad y se cosecharon después de 10, 15, 20 y 25 días de cada tratamiento. Aunque los valores de peso seco de los microgreens aumentaron gradualmente de 10 a 25 días en ambos tratamientos, los microgreens cultivados bajo tratamiento de luz presentaron niveles de peso seco ligeramente más altos que los cultivados en la oscuridad. El ácido rosmarínico y el contenido total de fenoles (TPC) también se analizaron utilizando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y el ensayo de Folin-Ciocalteu. Los patrones de acumulación de ácido rosmarínico y TPC aumentaron y disminuyeron gradualmente, respectivamente, en microgreens cultivados en oscuridad continua. La mayor acumulación se observó en microgreens cultivados durante 20 días. Sin embargo, los valores de ácido rosmarínico y TPC no fueron significativamente diferentes en microgreens cultivados bajo condiciones de luz. Según el ensayo de inhibición del radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH), se confirmó que los extractos de microgreens eran fuertes antioxidantes, y su capacidad para eliminar radicales DPPH se correlacionó positivamente con el contenido total de fenoles en los microgreens después de 10, 15, 20 y 25 días de ambos tratamientos. Considerando los valores relativamente más altos de peso seco, ácido rosmarínico, TPC y el ensayo DPPH, los microgreens después de 20 días de oscuridad y 20 días de tratamiento de luz, respectivamente, fueron seleccionados para evaluar la actividad antibacteriana utilizando nueve patógenos. Ambos extractos de microgreens mostraron una fuerte actividad antibacteriana contra los patógenos. En particular, los extractos de microgreens cultivados durante 20 días bajo tratamiento de luz mostraron efectos antimicrobianos más altos. Por lo tanto, los tratamientos de luz durante 20 días, así como el tratamiento en oscuridad durante 20 días, fueron las mejores condiciones para la producción de microgreens debido a sus altos niveles de peso seco, fenoles y actividades biológicas.