El propósito de este estudio fue aclarar los efectos del tratamiento antimicrobiano para la mastitis leve causada por bacterias Gram-positivas en la microbiota de la leche en ganado lechero. Se incluyeron dieciséis cuartos de dieciséis vacas con mastitis clínica leve del mismo rebaño en el estudio. En el día de inicio (día 0), las vacas fueron asignadas aleatoriamente a un grupo sin tratamiento (NT; = 10) o a un grupo de tratamiento antimicrobiano intramamario (AMT) que recibió AMT a partir del día 0 (grupo AMT-AMT; = 6). Al día siguiente (día 1), las vacas del grupo NT fueron asignadas aleatoriamente a un grupo NT (grupo NT-NT; = 3) que no recibió tratamiento o a un grupo AMT que recibió AMT a partir del día 1 (grupo NT-AMT; = 7). Se recolectaron muestras de leche en los días 0, 1, 3 y 7, y la microbiota de la leche de cada muestra fue analizada de manera exhaustiva mediante secuenciación de amplicones del gen 16S rRNA del ADN de la leche. Durante el período de tratamiento, la microbiota de la leche del grupo NT-NT no cambió, pero las de los grupos NT-AMT y AMT-AMT cambiaron significativamente en los días tres y siete. Así, el uso de antimicrobianos para la mastitis leve causada por bacterias Gram-positivas cambia la composición de la microbiota de la leche.