El acteosido (ACT), un compuesto prominente de la clase de glicósidos feniletilénicos tipo hidroxitirosol (HPG), se encuentra en las plantas y tiene un potencial significativo para aplicaciones alimentarias y farmacéuticas. Sin embargo, la producción limitada de ACT en las plantas restringe su utilización más amplia. Aunque las vías biosintéticas de ACT se comprenden cada vez más, sus mecanismos de transporte dentro de las plantas siguen siendo poco claros. RgMATE6, un transportador de tipo vacuolar de Extrusión de Multidrogas y Compuestos Tóxicos (MATE) identificado en (una planta conocida por la producción de ACT), fue seleccionado para la investigación. Este estudio tiene como objetivo dilucidar el papel de RgMATE6 en el transporte de ACT y su impacto en la biosíntesis de ACT. Nuestro estudio utilizó un enfoque multidisciplinario, que incluyó análisis in silico para predecir la especificidad del sustrato, PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) para cuantificar la expresión génica, HPLC para medir los niveles de HPG, ensayos de captación de vesículas de membrana vacuolar para validar la actividad de transporte de RgMATE6 in vitro, y transformación genética para evaluar sus roles funcionales in vivo. El análisis in silico identificó a RgMATE6 como un transportador de compuestos fenólicos, y el análisis de correlación reveló una fuerte asociación positiva entre la acumulación de HPG y la expresión en . La validación funcional a través de ensayos de captación de vesículas de membrana vacuolar en confirmó el papel de RgMATE6 como transportador de HPG, demostrando una preferencia significativa por el ACT. Experimentos de sobrerregulación y represión en demostraron además que RgMATE6 facilita la importación de ACT en vacuolas y mejora su producción. Además, el análisis de expresión específica de tejidos reveló los patrones de expresión coordinada entre y seis genes biosintéticos de ACT en las plantas transgénicas. RgMATE6 facilita el transporte y la acumulación de ACT dentro de las vacuolas, y su expresión podría sinergizar con la biosíntesis de ACT. Estos hallazgos establecen un marco para mejorar la producción de ACT y otros HPG a través de la manipulación dirigida de los transportadores MATE de las plantas.