En este estudio, nuestro objetivo fue comprender mejor la diferencia entre las funciones de los dos tipos de células de la granulosa y buscar descubrir más genes clave involucrados en el desarrollo y selección de folículos. Aquí, recolectamos por separado células de la granulosa de folículos pre-hierárquicos (PHGCs) y células de la granulosa de folículos preovulatorios (POGCs) para la extracción de ARN; se compararon los transcriptomas de los dos grupos mediante RNA-seq. Se identificaron un total de 5273 genes expresados diferencialmente (DEGs) entre los PHGCs y los POGCs; 2797 genes estaban regulados al alza y 2476 estaban regulados a la baja en los PHGCs en comparación con los POGCs. Un análisis de qPCR confirmó que los patrones de expresión de 16 DEGs seleccionados al azar eran altamente consistentes con los resultados de RNA-seq. En los POGCs, muchos de los genes con el aumento más significativo en la expresión estaban relacionados con la síntesis de hormonas esteroides. Además, los genes con la disminución más significativa en la expresión, incluyendo y, estaban relacionados con la inhibición de la síntesis de hormonas esteroides. Estos resultados sugieren que las hormonas esteroides juegan un papel clave en el desarrollo de folículos. Además, un análisis de Ontología de Genes (GO) reveló que estos DEGs estaban principalmente involucrados en el proceso metabólico primario, el proceso metabólico de carbohidratos, el proceso celular, ribosomas, el citoplasma y procesos intracelulares. Un análisis de enriquecimiento de la Enciclopedia de Genes y Genomas de Kyoto (KEGG) mostró que los DEGs estaban principalmente enriquecidos en biosíntesis de esteroides, el ciclo celular, ribosomas, la vía de señalización TGF-beta, adhesión focal, y así sucesivamente. También observamos la morfología de los folículos en diferentes etapas de desarrollo, y los resultados mostraron que el grosor de la capa granular de los pequeños folículos amarillos (SYFs) disminuyó significativamente con el desarrollo posterior. Además, también encontramos que el grosor de la capa de granulosa de las gallinas de más de 300 días era significativamente menor que el de las gallinas de 200 días. En resumen, estos datos indican que la morfología y función del tejido de las células de la granulosa cambian a lo largo del desarrollo del folículo.