El cultivo celular de peces es una herramienta in vitro común para estudios en diferentes campos como la virología, toxicología, patología e inmunología de los peces. Los cultivos celulares de peces son una ayuda prometedora para estudiar cómo diagnosticar y controlar infecciones virales y bacterianas intracelulares relevantes en la acuicultura. También se pueden utilizar para desarrollar vacunas e inmunoestimulantes, especialmente con la demanda ética que busca reducir y reemplazar el número de peces utilizados en la investigación. Este estudio tuvo como objetivo aislar cultivos celulares primarios de riñón cefálico de tres salmonidos chilenos y caracterizar la respuesta a estímulos bacterianos y virales evaluando varios marcadores de la respuesta inmune innata y adaptativa. Específicamente, los cultivos celulares primarios del riñón cefálico de los tres salmonidos estudiados fueron cultivados y expuestos a dos sustancias que imitan patrones moleculares de diferentes patógenos, es decir, lipopolisacárido (LPS) (bacteriano) y ácido poliinosinico: poliacídico (POLY I:C). Posteriormente, determinamos los perfiles de expresión de ARNm de los genes TLR-1, TLR-8, IgM, TLR-5 y MHC II. Los cultivos celulares primarios de riñón cefálico de las tres especies cultivadas in vitro respondieron de manera diferente a POLY I:C y LPS. Este es el primer estudio que demuestra y caracteriza la expresión de genes inmunes en cultivos celulares primarios de riñón cefálico aislados de tres especies de salmonidos. También indica su posible papel en el desarrollo de respuestas inmunes como agentes de respuesta defensiva y objetivos de factores inmunorreguladores.