Se requieren esfuerzos continuos para encontrar formas de proteger la producción de cultivos contra la toxicidad de los hidrocarburos del petróleo, como el diésel, y la contaminación de los suelos. Existe la necesidad de identificar plantas candidatas que sean tolerantes a la toxicidad del diésel y que también puedan tener el potencial para la remediación de suelos contaminados con diésel. En este estudio, la petunia, una planta ornamental popular y una planta experimental modelo en la investigación sobre fitorremediación de contaminantes ambientales, se utilizó para evaluar un método novedoso para evaluar rápidamente la toxicidad del diésel basado en la tolerancia de los brotes generados a través de la selección de cultivos de células vegetales in vitro. Las líneas de brotes de petunia (L1 a L4) regeneradas a partir de callos tratados con diésel se compararon con las de callos no tratados con diésel (control). Se observaron diferencias morfológicas significativas entre las líneas probadas y el control, notablemente con L1 y L4 mostrando un crecimiento superior. En particular, L4 exhibió una notable adaptabilidad, con un mayor desarrollo de raíces y recuentos microbianos en una mezcla para macetas contaminada con diésel, lo que sugiere que los brotes mostraron una tolerancia mejorada a la exposición al diésel. Aquí, se ha demostrado que este bioensayo rápido identifica de manera efectiva plantas con diferentes niveles de tolerancia a la toxicidad del diésel y, por lo tanto, podría ayudar a acelerar la selección de plantas superiores para la fitorremediación. Se necesita más investigación para comprender los mecanismos genéticos y fisiológicos subyacentes a los rasgos de tolerancia, con posibles aplicaciones más allá de las petunias a otras plantas ambientalmente significativas.