Tiempo real en vitro de la anisotropía de fluorescencia del reloj circadiano cianobacteriano
Autores: Heisler, Joel; Chavan, Archana; Chang, Yong-Gang; LiWang, Andy
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2019
Acceso abierto
Artículo científico
2019
Tiempo real en vitro de la anisotropía de fluorescencia del reloj circadiano cianobacteriano
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Reloj circadiano
Cianobacterias
KaiA
KaiB
KaiC
ATP
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 27
Citaciones: Sin citaciones
De manera única, el reloj circadiano de las cianobacterias puede ser reconstruido fuera del complejo entorno de las células vivas, simplificando en gran medida la investigación de un cronómetro biológico en funcionamiento. El componente del oscilador central está compuesto solo por tres proteínas, KaiA, KaiB y KaiC, y junto con el ATP experimentan ondas de ensamblaje y desensamblaje que impulsan los ritmos de fosforilación en KaiC. Por lo general, los puntos temporales de estas reacciones se analizan ex post facto mediante electroforesis en gel de poliacrilamida desnaturalizante, ya que esta técnica resuelve los diferentes estados de fosforilación de KaiC. Aquí, describimos un método más sensible que permite el monitoreo en tiempo real de la reacción del reloj. Al marcar una de las proteínas del reloj con un fluoróforo, en este caso KaiB, la reacción del reloj in vitro puede ser monitoreada por anisotropía de fluorescencia en una escala de tiempo de minutos durante semanas.
Descripción
De manera única, el reloj circadiano de las cianobacterias puede ser reconstruido fuera del complejo entorno de las células vivas, simplificando en gran medida la investigación de un cronómetro biológico en funcionamiento. El componente del oscilador central está compuesto solo por tres proteínas, KaiA, KaiB y KaiC, y junto con el ATP experimentan ondas de ensamblaje y desensamblaje que impulsan los ritmos de fosforilación en KaiC. Por lo general, los puntos temporales de estas reacciones se analizan ex post facto mediante electroforesis en gel de poliacrilamida desnaturalizante, ya que esta técnica resuelve los diferentes estados de fosforilación de KaiC. Aquí, describimos un método más sensible que permite el monitoreo en tiempo real de la reacción del reloj. Al marcar una de las proteínas del reloj con un fluoróforo, en este caso KaiB, la reacción del reloj in vitro puede ser monitoreada por anisotropía de fluorescencia en una escala de tiempo de minutos durante semanas.