La práctica de entrega de semen es crucial para la eficiencia de la inseminación artificial utilizando esperma de verraco de alta calidad. El presente estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto de un método común de entrega de semen, una caja de poliestireno, bajo temperaturas elevadas sobre la calidad y funcionalidad del esperma de verraco e investigar las respuestas moleculares subyacentes del esperma al aumento de temperatura. Se utilizaron tres muestras de semen agrupadas de 10 verracos Duroc (3 eyaculaciones por verraco) en este estudio. Cada muestra de semen agrupada se dividió en dos alícuotas. Una alícuota se almacenó a una temperatura constante de 17 grados C como grupo de control. La otra se empaquetó en una caja de poliestireno bien sellada y se colocó en un incubador a 37 grados C durante 24 horas para simular la entrega de semen en días calurosos de verano y posteriormente se transfirió a un refrigerador a 17 grados C durante 3 días. La temperatura del semen se monitoreó continuamente. La temperatura del semen era de 17 grados C a 0 horas de almacenamiento y alcanzó 20 grados C a 5 horas, 30 grados C a 14 horas y 37 grados C a 24 horas. Para cada punto en el tiempo, se determinaron la calidad y funcionalidad del esperma, los cambios apoptóticos, los niveles de expresión de AMPK fosforilado y las proteínas de choque térmico HSP70 y HSP90 mediante CASA, citometría de flujo y Western blotting. Los resultados mostraron que la temperatura elevada durante la entrega deterioró significativamente la calidad y funcionalidad del esperma de verraco después de 14 horas de entrega. El almacenamiento de nuevo a 17 grados C no recuperó la motilidad del esperma. Un aumento de temperatura durante la entrega aparentemente promovió la conversión de la apoptosis temprana del esperma a la apoptosis tardía, mostrando un aumento significativo en los niveles de expresión de Bax y Caspasa 3. Los niveles de AMPK fosforilado se indujeron en gran medida por el aumento de temperatura a 20 grados C durante la entrega, pero se redujeron posteriormente. Con la elevación de temperatura, los niveles de expresión de HSP70 y HSP90 aumentaron notablemente. Nuestros resultados indican que un aumento de temperatura durante la entrega de semen daña gravemente la calidad y funcionalidad del esperma al promover la apoptosis del esperma. HSP70 y HSP90 podrían participar en la resistencia del esperma de verraco a los cambios de temperatura al estar asociados con la activación de AMPK y procesos antiapoptóticos.