La alimentación de gallinas ponedoras con harina de larvas de mosca soldado negra (BSFL) mejora su rendimiento. Sin embargo, el mecanismo beneficioso de las harinas de BSFL para mejorar el rendimiento de las gallinas ponedoras sigue siendo poco claro. Este estudio investigó los efectos de la dieta de BSFL en el metabolismo hepático, la fisiología intestinal y la microbiota intestinal en gallinas ponedoras. Ochenta y siete gallinas Julia fueron asignadas aleatoriamente a tres grupos según sus dietas y se alimentaron con dietas a base de grano de maíz y harina de soja mezcladas con 3% de harina de pescado (dieta de control), 1.5% de harina de pescado y 1.5% de harinas de BSFL, o 3% de harina de BSFL durante 52 semanas. No se observaron diferencias significativas en los parámetros bioquímicos, el contenido de aminoácidos hepáticos y ácidos grasos saturados, la actividad de disacaridasas en la mucosa intestinal y la morfología intestinal entre las gallinas alimentadas con dieta de BSFL y las alimentadas con dieta de control. Sin embargo, la dieta de BSFL aumentó significativamente la abundancia de bacterias productoras de ácido acético y propiónico, los ácidos grasos de cadena corta en el ciego, y modificó las vías microbianas cecales asociadas con el metabolismo de los ácidos biliares. Estos hallazgos indican que consumir una dieta que contenga harina de BSFL tiene efectos mínimos en el metabolismo nutricional plasmático y hepático en gallinas ponedoras; sin embargo, puede alterar la microbiota intestinal asociada con la producción de ácidos grasos de cadena corta, así como las vías microbianas involucradas en el metabolismo de grasas intestinales. En conclusión, este estudio proporciona evidencia de que la BSFL puede mejorar el metabolismo de los enterocitos y la homeostasis intestinal en gallinas ponedoras.