Este estudio se realizó para evaluar los efectos de la suplementación materna con 25-hidroxicolecalciferol (25-OH-D) en el rendimiento de las cerdas, así como las alteraciones dinámicas de los perfiles de aminoácidos y ácidos grasos en la leche. En el día 85 de gestación, veinte cerdas híbridas primíparas fueron asignadas a dos grupos (10 cerdas/grupo) y alimentadas con una dieta basal (3200 UI/kg de vitamina D) que contenía 0 o 50 g/kg de 25-OH-D hasta el destete en el día 21 de lactancia. Se recolectó leche en los días 1, 3, 7, 14 y 21 de lactancia. Los resultados mostraron que la suplementación dietética con 25-OH-D disminuyó notablemente el puntaje de manchas de lágrimas en el día 101 de gestación en comparación con el grupo Ctrl (p = 0.030). No se encontró diferencia significativa en términos de día de gestación, tamaño de camada y peso de la camada al nacer, mientras que la intervención materna con 25-OH-D aumentó notablemente el peso al destete y el aumento de peso del lechón (p < 0.05), mientras que la suplementación dietética con 25-OH-D contribuyó a un aumento del 16.4% en el peso corporal durante la lactancia. La concentración de todos los aminoácidos en la leche fue mayor en el calostro, seguido de una caída dramática. La tasa de reducción de todos los aminoácidos aumentó con la suplementación dietética con 25-OH-D. Los contenidos de ácidos grasos saturados y ácidos grasos poliinsaturados aumentaron y disminuyeron linealmente a lo largo de la lactancia (ambos p < 0.05). La suplementación dietética con 25-OH-D inicialmente suprimió tanto los niveles de ácidos grasos saturados como insaturados del día 1 al 7, mientras que promovió una recuperación de ácidos grasos específicos del día 14 al 21 de lactancia, particularmente ácido oleico, ácido linoleico y ácido araquidónico. Estos hallazgos indican que la suplementación materna con 25-OH-D altera el patrón de composición de ácidos grasos y aminoácidos en la leche, lo que puede estar asociado con la mejora observada en los resultados de los lechones.