La inseminación artificial es una importante tecnología de reproducción asistida que se ha aplicado en varias especies de mamíferos. Sin embargo, la criopreservación exitosa del semen de los camélidos sudamericanos ha sido limitada, lo que dificulta la aplicación comercial de la inseminación artificial en especies de alpacas. En este escenario, la adición de antioxidantes a los diluyentes de semen proporciona una estrategia para mejorar la capacidad de congelación del esperma mamífero. Los metabolitos bioactivos de extractos naturales de maca negra han mostrado valiosas propiedades antioxidantes. Así, el objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la adición de maca negra atomizada en el medio de congelación de los espermatozoides epididimarios de alpacas. Se recolectaron quince pares de epidídimos de un matadero local. Cada muestra se dividió en seis grupos: (1) fresco, (2) medio de yema (YM), (3) 10 mg/mL de maca, (4) 20 mg/mL de maca, (5) 30 mg/mL de maca y (6) resveratrol (como control antioxidante). La criopreservación del esperma se realizó mediante el método de congelación lenta. Se analizaron marcadores asociados con la funcionalidad, como la motilidad, viabilidad e integridad de la membrana plasmática, así como marcadores asociados con daño oxidativo, como la integridad del ADN, la producción total de ROS y la función mitocondrial. Los resultados muestran que la suplementación con maca negra (20 mg/mL) mejoró la motilidad del esperma, la viabilidad, la integridad de la membrana plasmática y la función mitocondrial evaluadas según un índice de depósitos de formazán. De manera similar, la producción de ROS disminuyó con maca a 20 mg/mL, aunque la integridad del ADN no mostró diferencias entre los grupos. Estos resultados sugieren que la maca a 20 mg/mL tiene efectos cito-protectores durante la congelación/descongelación de los espermatozoides epididimarios de especies de alpaca. Investigaciones futuras se centrarán en evaluar los efectos de la suplementación con maca en los diluyentes de semen utilizando marcadores biomoleculares (proAKAP4) asociados con la fertilidad.