Los ensayos de digestibilidad necesitan un fluido ruminal viable para degradar los alimentos. La variabilidad del fluido ruminal depende de la dieta del animal, mientras que su viabilidad está influenciada en gran medida por los procedimientos de muestreo y manipulación. En este artículo, presentamos un protocolo replicable para el muestreo del fluido ruminal de animales sacrificados para ensayos de digestibilidad. Se presenta una lista detallada de las herramientas y un procedimiento estandarizado paso a paso para la recolección, almacenamiento y transporte del fluido ruminal desde el matadero hasta el laboratorio. También describimos un ensayo de digestibilidad para establecer el tiempo máximo de almacenamiento del fluido ruminal desde el muestreo hasta su uso. Los resultados muestran que el fluido ruminal, recolectado y mantenido de acuerdo con el protocolo propuesto, se puede almacenar y utilizar de 30 a 300 minutos desde el muestreo sin comprometer significativamente la actividad fermentativa de la población microbiana.