El cotransportador Na/Pi tipo II (NaPi2b), codificado por el transportador de solutos (SLC) 34A2 (SLC34A2), es responsable de la homeostasis del calcio (Ca) y el fósforo (P). Un metabolismo desequilibrado de Ca/P induce mastitis en vacas lecheras. Sin embargo, el papel específico de SLC34A2 en la regulación de este desequilibrio en vacas Holstein con mastitis clínica (CM) sigue siendo incierto. El objetivo de este estudio fue investigar el papel de SLC34A2 e identificar proteínas expresadas diferencialmente (DEPs) que interactúan con SLC34A2 y están asociadas con el metabolismo de Ca/P en vacas lecheras con CM. Los resultados de la tinción inmunohistoquímica e inmunofluorescencia mostraron que SLC34A2 se localizó principalmente en las células epiteliales mamarias de los alvéolos mamarios tanto en el grupo de control (vacas sanas, Con/C) como en el grupo de CM. En comparación con el grupo Con/C, la expresión relativa del gen y la proteína se redujo significativamente en el grupo de CM. Identificamos 12 DEPs importantes incluidos en 11 términos de GO y dos vías que interactúan con SLC34A2 utilizando proteómica de adquisición independiente de datos. Los resultados de la red de interacción proteína-proteína (PPI) sugirieron que estas DEPs estaban asociadas con el metabolismo y la homeostasis de iones, especialmente SLC34A2. Estos resultados demuestran que la downregulación de SLC34A2 está correlacionada negativamente con la aparición y el desarrollo de CM en vacas Holstein, proporcionando una base para explorar la función y el mecanismo regulador de SLC34A2 en el metabolismo y la homeostasis de Ca/P en vacas Holstein con CM.