Una de las enfermedades más peligrosas que influye en la salud humana a nivel mundial es la infección microbiana. Por lo tanto, las nanopartículas bimetálicas han recibido mucha atención para controlar las infecciones microbianas en la década actual. En el presente estudio, se biosintetizaron de manera efectiva nanopartículas bimetálicas de selenio-plata (Se-Ag NPs) utilizando extracto de cáscara de sandía (WR) a través de la técnica verde por primera vez. Se utilizaron métodos de espectroscopia UV-visible, microscopía electrónica de transmisión (TEM) y espectroscopia de rayos X por dispersión de energía (EDX) para caracterizar las NPs producidas. Los resultados indicaron que las NPs bimetálicas Se-Ag tenían actividad antimicrobiana sinérgica a bajas concentraciones, lo que ayudó a reducir la toxicidad de las NPs de Ag después de la preparación de las NPs bimetálicas Se-Ag y aumentar su gran potencial. Se detectaron NPs de Se-Ag con tamaños que oscilaban entre 18.3 nm y 49.6 nm mediante TEM. Las superficies de las NPs de Se-Ag eran uniformemente visibles en la imagen de SEM. La citotoxicidad de las NPs bimetálicas Se-Ag se evaluó contra la línea celular normal Wi38 para verificar su seguridad, donde el IC fue de 168.42 ug/mL. Los resultados mostraron que las NPs bimetálicas Se-Ag tenían acción antibacteriana contra , , , , , y con una concentración mínima inhibitoria (MIC) de 12.5 a 50 ug/mL. Además, las NPs bimetálicas Se-Ag mostraron una prometedora actividad anticancerígena hacia la línea celular cancerosa MCF7, donde el IC fue de 21.6 ug/mL. En conclusión, las NPs bimetálicas Se-Ag fueron biosintetizadas por primera vez utilizando extracto de WR, que tenía fuertes propiedades antibacterianas, antifúngicas y anticancerígenas.