La cepa recién aislada Burkholderia sp. SCN-KJ, capaz de producir simultáneamente polihidroxibutirato (PHB) intracelular y exopolisacárido (EPS) a partir de glicerol crudo derivado de biodiésel, presentó un desafío significativo en este estudio debido a la interferencia de la síntesis de EPS. Se identificó el gen bceA, que codifica una proteína bifuncional responsable de la isomerización de mannosa-6-fosfato y de la reacción de guanililtransferasa de mannosa-1-fosfato, como un regulador clave de la producción de EPS. Para abordar este problema, se empleó interferencia CRISPR (CRISPRi) dirigida al gen bceA, lo que condujo a la supresión completa de la síntesis de EPS y a una mejora significativa en el rendimiento de PHB. Bajo condiciones de cultivo optimizadas, la cepa mutante ΔbceA presentó inhibición total de la producción de EPS, resultando en un aumento de 1.75 veces en la concentración de PHB y en un PHB de mayor peso molecular que el de la cepa silvestre Burkholderia sp. SCN-KJ. Estos resultados destacan la eficacia de la silenciamiento mediado por dCas9 del gen bceA para superar los desafíos provocados por la interferencia de EPS y subrayan su potencial para incrementar la producción de PHB en Burkholderia sp. SCN-KJ.