La toxoplasmosis es una de las enfermedades protozoarias más importantes con un impacto global en la salud de los gatos domésticos y con significancia zoonótica. Los objetivos de este estudio fueron determinar la prevalencia de seropositividad en diferentes poblaciones de gatos en Grecia y evaluar los factores de riesgo para la seropositividad. Un total de 457 gatos fueron inscritos prospectivamente, y se utilizó un kit de prueba de anticuerpos por inmunofluorescencia indirecta (IFAT) disponible comercialmente para la detección de anticuerpos anti-inmunoglobulina G (IgG) en suero. En general, 95 (20.8%) de los 457 gatos fueron seropositivos. Basado en un análisis multivariado, los factores asociados con la seropositividad incluyeron una edad mayor [razón de momios (OR), 1.33; < 0.001]; un historial de trauma por peleas de gatos (OR, 3.88; = 0.004); y la falta de vacunación contra calicivirus, herpesvirus-1, panleucopenia y rabia (OR, 10; = 0.002). Este estudio muestra una alta prevalencia de seropositividad en gatos en Grecia. Esto implica que la toxoplasmosis sigue siendo una importante preocupación de salud pública y que se deben establecer estrategias óptimas para la prevención de la infección en gatos.