La mancha marrón de Alternaria (ABS), causada por , es una de las principales enfermedades de los cítricos que provoca importantes pérdidas de producción y reducciones en la calidad de la fruta a nivel mundial. La aplicación de fungicidas químicos juega un papel clave en el manejo de ABS. En este estudio, se probaron in vitro 48 aislamientos de obtenidos de huertos de cítricos desde 2014 para determinar su sensibilidad al piraclostrobina y al fludioxonil, este último registrado temporalmente en Italia desde 2020. La sensibilidad al piraclostrobina se determinó mediante ensayos de germinación de esporas y crecimiento micelial. Se determinó la concentración efectiva que inhibe el crecimiento fúngico en un 50% (EC) para cada aislamiento. Los ensayos de sensibilidad mostraron que la mayoría de los aislamientos probados eran sensibles al piraclostrobina. Los valores de EC del fludioxonil en un ensayo de crecimiento micelial indicaron que el 100% de los aislamientos eran sensibles a este fungicida. El análisis del gen citocromo b mostró que ninguno de los 40 aislamientos con un perfil de sensibilidad diferente tenía la mutación G143A, y el subgrupo de 8 aislamientos analizados por PCR en tiempo real no portaba las mutaciones G137R y F129L. Se seleccionó un subconjunto de cuatro aislamientos más sensibles y dos aislamientos con sensibilidad reducida para evaluar la sensibilidad en hojas de cítricos separadas tratadas con piraclostrobina a la dosis máxima recomendada en la etiqueta. La incidencia de la enfermedad y la gravedad de los síntomas se redujeron significativamente, con una pequeña reducción reportada en hojas inoculadas con los aislamientos de sensibilidad reducida. Además, no hubo correlación entre la sensibilidad y los parámetros de aptitud evaluados in vitro (crecimiento del micelio y tasa de esporulación). Estos hallazgos ayudan al desarrollo de programas de monitoreo de resistencia y, en consecuencia, establecen estrategias efectivas contra la resistencia para el manejo de ABS en huertos de cítricos.