En este estudio, se observaron los efectos sobre el rendimiento de crecimiento, la digestibilidad de nutrientes, la producción de ácidos grasos volátiles (AGV) y la microbiota fecal de burros destetados utilizando diferentes secuencias de alimentación con concentrados. Quince burros machos destetados, sanos y de 6 meses de edad con un peso corporal de 117.13 +/- 10.60 kg fueron divididos aleatoriamente en tres grupos de tratamiento, incluyendo el grupo C1 (forraje-luego-concentrado), el grupo C2 (concentrado-luego-forraje) y el grupo C3 (ración total mezclada, RTM). El experimento duró 35 días. Medimos la digestión de nutrientes mediante el método de ceniza insoluble en ácido y analizamos la microbiota fecal de los burros destetados mediante secuenciación de alto rendimiento de genes 16s rRNA en la región V-V. Los resultados muestran que el grupo C3 obtuvo el mejor rendimiento de crecimiento, y la digestibilidad de la proteína cruda (PC) y el extracto etéreo (EE) fue significativamente mayor que la del grupo C1 (< 0.05). El ácido acético, el ácido isobutírico, el ácido valérico, el ácido isovalérico y el ácido caproico fueron notablemente diferentes entre todos los grupos (< 0.05). Además, observamos que Firmicutes y Bacteroidetes eran dominantes en los microbios fecales de cada grupo, y Firmicutes fue significativamente mayor en el grupo C3 (< 0.05). A nivel de género, los diferentes géneros fueron Treponema, Rikenellaceae-RC9-gut-group, Unidentified-F082 y Bacteroidales-RF16-group (< 0.05). La predicción de la función de la microbiota fecal por PICRUSt indicó que las diferentes secuencias de alimentación tuvieron un impacto mínimo en la función de la microbiota fecal, particularmente en la vía de alta abundancia. En resumen, la secuencia de alimentación con concentrados cambió la composición de los microbios fecales de los burros destetados.