El horehound negro (L.) es una de las plantas medicinales más importantes, como una rica fuente de aceites esenciales y metabolitos que promueven la salud. El estrés por salinidad afecta el desarrollo de la planta y altera la actividad antioxidante y la composición de metabolitos de la planta. La presente investigación tuvo como objetivo estudiar el efecto de la salinidad en los cambios fisiológicos y bioquímicos y metabolitos de bajo condiciones de invernadero y en cultivo in vitro. Las plantas fueron tratadas con diferentes concentraciones de NaCl (25, 50, 75, 100 mM), y se midieron las características morfológicas de la planta. Los rasgos relacionados con el crecimiento y el desarrollo del análisis de plantas en suelo (SPAD) disminuyeron tanto in vivo como in vitro. Además, la mayor concentración de sal afectó negativamente la integridad de la membrana celular. El contenido total de fenoles y flavonoides de las plantas que crecen en el invernadero aumentó un 21% a 50 mM de NaCl, pero las cantidades disminuyeron significativamente en niveles de estrés más altos (100 mM de NaCl). También se midió la actividad antioxidante. Entre los tratamientos de NaCl, las actividades de eliminación de DPPH (IC) más aumentadas bajo condiciones de invernadero y in vitro se detectaron en un estrés salino leve, pero la actividad disminuyó significativamente en tratamientos de salinidad más altos (es decir, 75 y 100 mM). En general, con el aumento del nivel de salinidad a 75 mM, las actividades de CAT y APX se regulaban significativamente tanto en condiciones de invernadero como en cultivo in vitro. Se obtuvo una correlación entre los contenidos totales de fenoles y flavonoides, así como la actividad antioxidante. El nivel de salinidad causó un cambio en la expresión de metabolitos. El estrés salino leve elevó los metabolitos involucrados en actividades anticancerígenas y antiinflamatorias, como el beta-ionone y el óxido de cariofileno. Sin embargo, el estrés por sal más alto resultó en una reducción significativa en su expresión. La expresión diferencial de metabolitos a varios niveles de estrés salino puede ser explotada aún más para la biosíntesis in vitro de metabolitos.