La vid (L.) es uno de los cultivos más importantes del mundo debido a su impacto económico y social. Al igual que muchos otros cultivos, la vid es susceptible a diferentes tipos de enfermedades causadas por microorganismos patógenos. El virus asociado a la enfermedad de enrollamiento de la hoja de la vid 1 (GLRaV-1) es un virus asociado con la enfermedad de enrollamiento de la hoja de la vid y se considera a nivel nacional y europeo como un patógeno que debe estar ausente en material vegetal propagativo. Por esta razón, la disponibilidad de técnicas de detección específicas, sensibles y fiables para determinar el estado sanitario de las plantas es de gran importancia. El objetivo de esta investigación fue el desarrollo de un nuevo método de detección de GLRaV-1 basado en una RT-PCR cuantitativa en tiempo real TaqMan dirigida a la región del genoma de la proteína de la cápside e incluyendo un control interno del hospedador en una reacción duplex. Para ello, se recuperaron tres nuevos genomas completos de GLRaV-1 mediante HTS y se alinearon con todas las secuencias disponibles en las bases de datos. El método ha sido validado siguiendo los estándares de EPPO y se ha aplicado para el diagnóstico de material vegetal de campo y vectores de transmisión. El nuevo protocolo diseñado ha resultado ser altamente sensible así como mucho más específico que los métodos actualmente disponibles para la detección y cuantificación absoluta del título viral de GLRaV-1.