La rotenona es un insecticida botánico ampliamente utilizado, que puede inhibir la cadena respiratoria mitocondrial de varias células de insectos, mientras que el mecanismo de su toxicidad para las células de insectos necesita una investigación adicional. El propósito de este estudio fue comprender el nivel de toxicidad de concentraciones bajas (0.2 ug/mL) y altas (20 ug/mL) de rotenona en células (SL-1) utilizando ensayos de tinción de azul de tripano y azul brillante de Coomassie. Nuestro estudio encontró que la rotenona poseía citotoxicidad contra las células SL-1 con efectos de acción variables entre concentraciones altas y bajas. Después del tratamiento con rotenona de baja concentración, las células SL-1 mostraron una clara agregación dependiente del tiempo, con la tasa de agregación más rápida observada en las primeras 8 h de tratamiento, pero no se observó tal fenómeno en concentraciones altas. Además, este fenómeno de agregación causó que las células SL-1 se comprimieran unas a otras y llevó a la destrucción de la estructura y función de la membrana celular. En conjunto, los resultados sugirieron que el tratamiento con una baja concentración de rotenona exhibió un efecto tóxico crónico que fue significativamente diferente del tratamiento con una alta concentración de rotenona, lo que proporciona una nueva visión sobre el mecanismo citotóxico de la rotenona.