Rol de la fosforilación de tirosina en el receptor PEP1 (PEPR1) en
Autores: Choi, Jae-Han; Oh, Man-Ho
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2025
Acceso abierto
Artículo científico
2025
Rol de la fosforilación de tirosina en el receptor PEP1 (PEPR1) en
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Botánica
Palabras clave
Quinasas similares a receptores con repeticiones ricas en leucina
PEPR1
PEPR2
Fosforilación de tirosina
Autofosforilación
Componentes aguas abajo
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 11
Citaciones: Sin citaciones
Las quinasas similares a receptores con repeticiones ricas en leucina (LRR-RLKs) han evolucionado para percibir cambios ambientales. Entre los LRR-RLKs, PEPR1 percibe el péptido pep1 y desencadena la transducción de señales de defensa. En el presente estudio, nos centramos en PEPR1 y PEPR2, que son los receptores de pep1, para comprender el papel de la fosforilación de tirosina. La proteína recombinante PEPR1-CD (dominio citoplasmático) mostró una fuerte autofosforilación de tirosina, incluida la autofosforilación de treonina. Sometimos todos los residuos de tirosina en PEPR1-CD a mutagénesis dirigida por sitio. Las proteínas recombinantes se purificaron junto con PEPR1-CD, y se realizó un Western blot utilizando un anticuerpo específico para tirosina. Entre los 13 residuos de tirosina en PEPR1-CD, la proteína recombinante PEPR1(Y995F)-CD mostró una intensidad de autofosforilación de tirosina significativamente reducida en comparación con PEPR1-CD y otros mutantes de tirosina, a pesar de que hubo poco cambio en la autofosforilación de treonina. Para confirmar el sitio de autofosforilación, generamos un anticuerpo específico para el péptido fosforilado, pY995. Como resultado, Tyr-995 de PEPR1-CD fue un sitio principal de autofosforilación de tirosina in vitro. Para comprender la función de la fosforilación de tirosina in vivo, generamos plantas transgénicas que expresan PEPR1-Flag, PEPR1(Y995F)-Flag y PEPR1(Y995D)-Flag en un fondo de doble mutante. Curiosamente, el crecimiento de las raíces de PEPR1(Y995F)-Flag y PEPR1(Y995D)-Flag no fue inhibido por el tratamiento con el péptido pep1, en comparación con las plantas transgénicas Col-0 y PEPR1-Flag. Además, analizamos los componentes descendentes, que incluían las expresiones génicas de PROPEP1, MPK3, WRKY33 y RBOHD en cuatro genotipos diferentes (Col-0, PEPR1-Flag, PEPR1(Y995F)-Flag y PEPR1(Y995D)-Flag) de plantas en presencia del péptido pep1. Curiosamente, las expresiones de PROPEP1, MPK3, WRKY33 y RBOHD no fueron reguladas por el tratamiento con el péptido pep1 en las plantas transgénicas PEPR1(Y995F)-Flag y PEPR1(Y995D)-Flag, en contraste con Col-0 y PEPR1-Flag. Estos resultados sugieren que residuos específicos de tirosina juegan un papel importante in vivo en la función del receptor de la planta.
Descripción
Las quinasas similares a receptores con repeticiones ricas en leucina (LRR-RLKs) han evolucionado para percibir cambios ambientales. Entre los LRR-RLKs, PEPR1 percibe el péptido pep1 y desencadena la transducción de señales de defensa. En el presente estudio, nos centramos en PEPR1 y PEPR2, que son los receptores de pep1, para comprender el papel de la fosforilación de tirosina. La proteína recombinante PEPR1-CD (dominio citoplasmático) mostró una fuerte autofosforilación de tirosina, incluida la autofosforilación de treonina. Sometimos todos los residuos de tirosina en PEPR1-CD a mutagénesis dirigida por sitio. Las proteínas recombinantes se purificaron junto con PEPR1-CD, y se realizó un Western blot utilizando un anticuerpo específico para tirosina. Entre los 13 residuos de tirosina en PEPR1-CD, la proteína recombinante PEPR1(Y995F)-CD mostró una intensidad de autofosforilación de tirosina significativamente reducida en comparación con PEPR1-CD y otros mutantes de tirosina, a pesar de que hubo poco cambio en la autofosforilación de treonina. Para confirmar el sitio de autofosforilación, generamos un anticuerpo específico para el péptido fosforilado, pY995. Como resultado, Tyr-995 de PEPR1-CD fue un sitio principal de autofosforilación de tirosina in vitro. Para comprender la función de la fosforilación de tirosina in vivo, generamos plantas transgénicas que expresan PEPR1-Flag, PEPR1(Y995F)-Flag y PEPR1(Y995D)-Flag en un fondo de doble mutante. Curiosamente, el crecimiento de las raíces de PEPR1(Y995F)-Flag y PEPR1(Y995D)-Flag no fue inhibido por el tratamiento con el péptido pep1, en comparación con las plantas transgénicas Col-0 y PEPR1-Flag. Además, analizamos los componentes descendentes, que incluían las expresiones génicas de PROPEP1, MPK3, WRKY33 y RBOHD en cuatro genotipos diferentes (Col-0, PEPR1-Flag, PEPR1(Y995F)-Flag y PEPR1(Y995D)-Flag) de plantas en presencia del péptido pep1. Curiosamente, las expresiones de PROPEP1, MPK3, WRKY33 y RBOHD no fueron reguladas por el tratamiento con el péptido pep1 en las plantas transgénicas PEPR1(Y995F)-Flag y PEPR1(Y995D)-Flag, en contraste con Col-0 y PEPR1-Flag. Estos resultados sugieren que residuos específicos de tirosina juegan un papel importante in vivo en la función del receptor de la planta.