La senescencia de las células endoteliales vasculares (ECs) se caracteriza como un sello distintivo del envejecimiento vascular, lo que conduce a la iniciación, progreso y avance de las enfermedades cardiovasculares. Sin embargo, el mecanismo de la senescencia de las ECs sigue siendo elusivo. En este estudio, se separaron las aortas torácicas de ratones jóvenes (de 8 semanas) y envejecidos (de 18 meses). Se observaron disminuciones en la expresión de Ctsl y un aumento en la remodelación vascular en la aorta senescente. Se utilizó HO para inducir la senescencia de las células endoteliales de vena umbilical humana (HUVECs), como se mostró por el aumento de células positivas para SA-beta-gal y el nivel elevado de p21. CTSV disminuyó significativamente después del tratamiento con HO, mientras que la sobreexpresión de CTSV mediante adenovirus redujo la senescencia celular. Se realizó un análisis de secuenciación de ARN y se observó que ALDH1A2 aumentó significativamente en el grupo HO y disminuyó tras la sobreexpresión de CTSV. Este resultado fue confirmado posteriormente por RT-PCR y WB. Además, la sobreexpresión de CTSV redujo el aumento de la fosforilación de ERK1/2 y AKT inducido por HO. Adicionalmente, se añadió ácido retinoico (RA), la principal producción de ALDH1A2, a las HUVECs senescentes sobreexpresadas con CTSV. La administración de RA activó AKT y ERK1/2, indujo la expresión de p21 y aumentó las células positivas para SA-beta-gal, sin afectar la expresión de CTSV y ALDH1A2. Estos resultados fueron confirmados en ECs senescentes inducidos por doxorubicina (DOX). En conclusión, hemos identificado que Ctsl/CTSV juega un papel clave en la senescencia de las ECs al regular ALDH1A2 para activar la vía AKT/ERK1/2-P21. Por lo tanto, dirigir Ctsl/CTSV puede ser una estrategia terapéutica potencial en la senescencia de EC.